什么是特定蛋白
血浆中含有许多蛋白质,它们来源于组织细胞,执行着各种功能,很多疾病都可以引起血浆蛋白质浓度的变化。血浆蛋白质具有良好的免疫原性,可以采用抗原抗体反应对具有某一特定抗原性的蛋白质进行定量或者定性测定,故称特定蛋白检测。临床常见的特定蛋白有:免疫球蛋白(IgG, IgA, IgM),补体C3, C4), C反应蛋白(CRP), 抗链球菌溶血素O(ASO),类风湿因子(RF),尿微量白蛋白, 转铁蛋白等。
随着免疫比浊技术的发展,其检测灵敏度也不断提高,许多以前使用特定蛋白分析仪不能检测的血液蛋白质,也能够定量检测,如糖化血红蛋白(HbA1c), D二聚体(D-Dimer), 胱抑素C(Cystatin C)等,因而特定蛋白的范畴也在不断扩大。
特定蛋白检测原理
随着越来越多的特定蛋白被应用于临床,其检测方法也发展迅速,上世纪80年代前常采用半定量免疫沉淀法和乳胶凝集法,后来发展出免疫比浊法,酶联免疫吸附法,胶体金免疫层析法,荧光免疫法,化学发光法。不过在目前,免疫比浊法因操作简单,检测成本低、结果准确可靠等优势,为最广泛使用的定量测定特定蛋白的检测方法。
而专门用来定量检测特定蛋白含量的仪器称为特定蛋白分析仪,特定蛋白分析仪几乎都以免疫比浊法作为基础原理。
1. 免疫比浊法根据仪器光学结构不同而分为免疫散射比浊法和免疫透射比浊法。
1) 免疫散射比浊法(Immunonephelometry):样本中特定蛋白与相应抗体或抗原在特殊缓冲液中反应形成抗原抗体复合物颗粒,使反应介质中出现浊度,当光通过反应介质时,形成光的散射,在一定条件下,样本中特定蛋白越多,形成的颗粒越多,则散射光信号越强;与一系列的标准品对照,即可计算出受检特定蛋白的含量。
2) 免疫透射比浊法(Immunoturbidimetry):样本中特定蛋白与相应抗体或抗原在特殊缓冲液中反应形成抗原抗体复合物颗粒,由于光的散射、折射,透过的光会减少,颗粒越多,则透过的光减少的越多;与一系列的标准品对照,即可计算出受检特定蛋白的含量。
传统观念认为,散射比浊法因为接受的光单一而检测灵敏度更高,不过,散射比浊需要专门仪器,生产厂家较少,而透射比浊还可在常规生化分析仪上进行,因使用量大,更利于技术进步,目前来看,透射比浊分析仪器更加稳定敏感,同时由于试剂技术的进步,透射和散射比浊在性能上的差别已经不明显。
2. 免疫比浊法根据试剂的不同分为普通免疫比浊法和乳胶增强比浊法,两者都有相应的透射比浊和散射比浊试剂。
1) 普通免疫比浊法:抗原抗体直接在液相中起反应形成抗原抗体复合物颗粒,通过颗粒的多少与接收光信号的比例关系,来计算待测特定蛋白的含量,适用于血浆含量较高的特定蛋白的检测,如免疫球蛋白,补体等。
2) 乳胶增强比浊法:选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒,吸附或者交联抗体后,当遇到抗原时,则发生交联和聚集。与普通免疫比浊法相比,乳胶增强比浊具有更高的检测敏感度。使用此方法对于那些含量很少的待测物,可大幅提高检测的敏感性。以前一些用普通免疫比浊法不能测出或者检测敏感性过低的血浆蛋白,如D二聚体,超敏C-反应蛋白,现在用此法可以定量测定。